伏馬毒素B1時間分辨免疫熒光檢測試劑盒的研制

Development of TRFIA kit for quantitative analysis of fumonisin B1

目的:為快速檢測食品中的伏馬毒素B1（fumonisin B1,FB1）,制備抗FB1的單克隆抗體并利用該抗體研制基于時間分辨免疫熒光分析方法的檢測試劑盒。方法:在建立抗伏馬毒素B1單克隆雜交瘤細胞株的基礎(chǔ)上,采用小鼠腹腔注射法生產(chǎn)大量腹水,經(jīng)Protein A親和層析柱分離純化、透析后得到單克隆抗體,利用所得抗體建立間接競爭性時間分辨免疫熒光分析試劑盒并優(yōu)化各參數(shù):線性范圍、檢出限及與黃曲霉毒素（aflatoxins,AFB1）、嘔吐毒素（deoxynivalenol,DON）和載體蛋白BSA等的交叉反應(yīng)性;對試劑盒穩(wěn)定性采用37℃破壞實驗;采用3個濃度的加標(biāo)回收試驗確定回收率;對19份樣品及FB1玉米盲樣進行檢測,并同時用市售ELISA試劑盒進行驗證。結(jié)果:所研制試劑盒的zui低檢出濃度為2ng/mL,檢測線性范圍為2～512ng/mL,線性方程2為Y=-0.644X+12.872（R=0.998）,50%抑制濃度為10.07ng/mL,加標(biāo)提取后,玉米樣品3個加標(biāo)水平的回收率在78.32%～116.76%之間,與AFB1、DON和BSA均無交叉反應(yīng)性,試劑盒常溫下可保存315d以上